一、目的

学习染色原理和方法，掌握微生物涂片、革兰氏染色、无菌操作技术；巩固显微镜的使用。

二、染色原理

微生物（尤其是细菌）个体微小，其机体是无色透明的，在显微镜下，微生物体与其背景反差小，不易看清微生物的形态和结构，若增加其反差，微生物的形态就可看得清楚，通常用染料将菌体染上颜色以增加反差，便于观察。

微生物细胞由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成，所以，微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。经测定，细菌等电点在pH＝2～5之间，故细菌在中性（pH＝7）、碱性（pH＞7）或偏酸性（pH＝6～7）的溶液中，细菌的等电点均低于上述溶液的pH值，所以细菌带负电荷，容易与带正电的碱性染料结合，故用碱性染料染色的为多。碱性染料有美蓝、甲基紫、结晶紫、龙胆紫、碱性品红、中性红、孔雀绿和蕃红等。

微生物体内各结构与染料的结合力不同，故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。